以FaTEx-gen快速淨化萃取套組搭配液相層析串聯質譜分析穀類樣體中之多重黴菌毒素

以FaTEx-gen快速淨化萃取套組搭配液相層析串聯質譜分析穀類樣體(ti) 中之多重黴菌毒素

應用批注

黴菌毒素

緒論

黴菌毒素為(wei) 黴菌增殖時產(chan) 生的次級代謝產(chan) 物，常見於(yu) 生活中，且黴菌的孢子能透過空氣、風力、水流和動物等方式來傳(chuan) 播。隻要有少量蛋白質、澱粉、脂質及水份，就是適合真菌生長的環境，因此麥類、果實類、玉米及花生都是真菌主要的生長處。黃曲毒素具有潛在性的肝毒害（hepatoxin）及致癌性，其化學特性使其能於(yu) 運輸儲(chu) 存期間穩定存在，因此黴菌毒素易出現在食物鏈中；且除了直接食用受感染的食物，也可能透過喂食受汙染飼料給動物而間接暴露於(yu) 相關(guan) 風險。

　　黴菌毒素汙染食品和飼料對於(yu) 全球性作物及動物養(yang) 殖產(chan) 業(ye) 影響甚巨，據估計每年約25%農(nong) 作物受到不同程度的黴菌毒素影響，單以美國和加拿大而言，真菌毒素即造成飼料業(ye) 和家畜業(ye) 每年損失約50億(yi) 美金(IFST, 2006)。

　　本篇應用以FaTEx-gen快速淨化萃取套組進行前處理，搭配LC-MS/MS檢測黃曲毒素的含量，建立一套快速的檢測方法，利於(yu) 維護飼料質量及相關(guan) 作物食品安全。

摘要

本研究以FaTEx快速淨化萃取套組，分析穀類樣品中之十一項黴菌毒素，包含黃曲毒素類、赭曲毒素A及鐮孢菌毒素類（伏馬毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（嘔吐毒素）、玉米赤黴毒素等），項目列表詳見表1。

　　針對黴菌毒素的檢測，通常會(hui) 依其種類選用相對應的特化免疫親(qin) 和管進行分析。此類免疫親(qin) 和管柱的分析效能具有專(zhuan) 一性，因此能分析的項目較限縮，通常為(wei) 專(zhuan) 項，或者有較多項的例如黃曲毒素專(zhuan) 用管則可同時分析黃曲毒素 B1、B2、G1、G2四項。然而在欲達成各種類多重毒素分析的目的時，於(yu) 檢測時程上便會(hui) 較耗時，且使用相對應特化管柱的成本也高許多。

　　本篇使用FaTEx淨化套組，搭配ZORBAX Eclipse Plus C18通用管柱及Agilent 6470液相層析串聯式質譜儀(yi) ，檢測黃豆及花生樣品，樣品之標準品添加濃度如表二；樣品製備流程如下，樣品秤樣後加標靜置，加入12mL 70:30 (v:v)乙腈/水溶液（含0.5%甲酸）以高速震蕩機震蕩30分鍾，於(yu) 3500rpm離心5分鍾，取上清液5mL經過FaTEx套組淨化，取檢液1.2mL以氮氣吹至微幹，再以1mL 50:50 (v:v)乙腈/水溶液回溶。分析結果如表三所示，回收率落在81.9~112.7%範圍內(nei) ，CV%皆小於(yu) 20，顯示此為(wei) 一快速、穩定之檢驗方法。

前處理步驟

液相層析參考條件

移動相流速：0.4 mL/min

進樣體(ti) 積：5µL

層析管柱：ZORBAX Eclipse Plus C18   Rapid Resolution HD   1.8μm,內(nei) 徑3.0 × 100 mm

流動相溶液

表1、黴菌毒素11項藥劑之多重反應偵(zhen) 測模式參數

結論

本篇以FaTEx-gen萃取淨化套組搭配ZORBAX Eclipse Plus C18管柱於(yu) 液相串聯質譜之分析方法，檢測穀類樣品（黃豆及花生）之多重黴菌毒素（黃曲毒素類、赭曲毒素A及鐮孢菌毒素類）共11項，每次分析時間13分鍾，為(wei) 快速之檢驗方法。

FaTEx-gen萃取淨化套組可針對複雜檢體(ti) 基質加強淨化，降低基質幹擾。

以FaTEx-gen套組檢測添加多重毒素標準品之穀類樣品（添加濃度：黃曲毒素B1 Aflatoxin B1,黃曲毒素B2  Aflatoxin B2,  黃曲毒素G1  Aflatoxin G1,  黃曲毒素G2 Aflatoxin G2,赭曲黴毒素 A  Ochratoxin A：2.5 ng/g，T-2 toxin, HT-2 toxin：5 ng/g；嘔吐毒素Deoxynivalenol, 玉米赤黴烯酮 Zearalenone：25 ng/g；伏馬毒素 B1  Fumonisin B1,伏馬毒素 B2  Fumonisin B2：100 ng/g）回收率落在81.9~112.7%範圍內(nei) ，變異係數皆小於(yu) 20，為(wei) 穩定之檢驗方法。